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【細(xì)胞融合技術(shù)】以人鼠細(xì)胞雜交為例說(shuō)明
點(diǎn)擊次數(shù):47 更新時(shí)間:2025-03-21

  人、鼠細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)分三步進(jìn)行∶

  首先用熒光染料標(biāo)記抗體∶

  將小鼠的抗體與發(fā)綠色熒光的熒光素(fluorescin)結(jié)合,人的抗體與發(fā)紅色熒光的羅丹明(rhodamine)結(jié)合;

  第二步是將小鼠細(xì)胞和人細(xì)胞在滅活的仙臺(tái)病毒的誘導(dǎo)下進(jìn)行融合;

  最后一步將標(biāo)記的抗體加入到融合的人、鼠細(xì)胞中,讓這些標(biāo)記抗體同融合細(xì)胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合。

  開(kāi)始,融合的細(xì)胞一半是紅色,一半是綠色。在37℃下40分鐘后,兩種顏色的熒光在融合的雜z種細(xì)胞表面呈均勻分布,這說(shuō)明抗原蛋白在膜平面內(nèi)經(jīng)擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)而重新分布。這種過(guò)程不需要ATP。如果將對(duì)照實(shí)驗(yàn)的融合細(xì)胞置于低溫(1℃)下培育,則抗原蛋白基本停止運(yùn)動(dòng)。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果令人信服地證明了膜整合蛋白的側(cè)向擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)。

  細(xì)胞融合關(guān)鍵

  1.技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如,供者淋巴細(xì)胞沒(méi)有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。

  2.融合試驗(yàn)最大的失敗原因是污染,融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)無(wú)毒無(wú)菌的操作環(huán)境。

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